PCR (Polymerase Chain Reaction)

Apa PCR (polymerase chain reaction)?

PCR (polymerase chain reaction) adalah metode untuk menganalisis urutan pendek DNA (atau RNA) bahkan dalam sampel yang mengandung hanya jumlah menit DNA atau RNA. PCR digunakan untuk mereproduksi (memperkuat) bagian yang dipilih dari DNA atau RNA. Sebelumnya, amplifikasi DNA yang terlibat kloning segmen bunga menjadi vektor untuk ekspresi pada bakteri, dan mengambil minggu. Tapi sekarang, dengan PCR dilakukan dalam tabung uji, hanya dibutuhkan beberapa jam. PCR ini sangat efisien sehingga tak terhitung salinan dapat dibuat dari DNA. Selain itu, PCR menggunakan molekul yang sama bahwa alam menggunakan untuk menyalin DNA:

Dua “primer”, urutan DNA beruntai tunggal pendek yang disintesis untuk sesuai dengan awal dan akhir dari peregangan DNA yang akan disalin;
Sebuah enzim yang disebut polimerase yang bergerak sepanjang segmen DNA, membaca kode dan perakitan salinan, dan
Setumpuk blok bangunan DNA yang polimerase perlu membuat salinan itu.

Bagaimana PCR (polymerase chain reaction) dilakukan?

Seperti diilustrasikan dalam gambar animasi PCR, tiga langkah utama yang terlibat dalam PCR. Ketiga langkah ini diulang selama 30 atau 40 siklus. Siklus dilakukan pada pengendara sepeda otomatis, perangkat yang dengan cepat memanaskan dan mendinginkan tabung reaksi berisi campuran reaksi. Setiap langkah – denatauration (perubahan struktur), anil (bergabung), dan penyuluhan – berlangsung pada suhu yang berbeda:

Denaturasi: Pada 94 C (201.2 F), DNA beruntai ganda mencair dan membuka ke dua potongan DNA beruntai tunggal.
Annealing: Pada suhu sedang, sekitar 54 C (129,2 F), pasangan primer up (anil) dengan beruntai tunggal “template” (. Template adalah urutan DNA yang akan disalin) Pada panjang kecil beruntai ganda DNA (primer bergabung dan template), polimerase menempel dan mulai menyalin template.
Perpanjangan: Pada 72 C (161.6 F), polimerase karya terbaik, dan blok bangunan DNA komplementer ke template yang digabungkan primer, membuat molekul DNA beruntai ganda.
Dengan satu siklus, segmen tunggal template DNA beruntai ganda diperkuat menjadi dua bagian yang terpisah dari DNA beruntai ganda. Kedua potong kemudian tersedia untuk amplifikasi pada siklus berikutnya. Sebagai siklus yang berulang, semakin banyak salinan yang dihasilkan dan jumlah salinan dari template meningkat secara eksponensial.

tujuan melakukan PCR (polymerase chain reaction)

Untuk melakukan PCR, DNA asli yang satu keinginan untuk menyalin tidak perlu murni atau berlimpah. Hal ini dapat murni tetapi juga dapat menjadi bagian menit campuran bahan. Jadi, PCR telah menemukan kegunaan yang luas dan tak terhitung – untuk mendiagnosa penyakit genetik, melakukan sidik jari DNA, menemukan bakteri dan virus, studi evolusi manusia, mengkloning DNA dari mumi Mesir, membangun ayah atau hubungan biologis, dll. Dengan demikian, PCR telah menjadi alat penting bagi ahli biologi, laboratorium forensik DNA, dan banyak laboratorium lain yang mempelajari materi genetik.

Bagaimana PCR (polymerase chain reaction) ditemukan?

PCR ditemukan oleh Kary Mullis. Pada saat ia terpikir PCR pada tahun 1983, Mullis bekerja di Emeryville, California untuk Cetus, salah satu perusahaan bioteknologi pertama. Di sana, ia didakwa dengan membuat rantai pendek DNA untuk ilmuwan lain. Mullis telah menulis bahwa ia dikandung PCR saat berlayar di sepanjang Pacific Coast Highway 128 satu malam di sepeda motornya. Ia bermain dalam pikirannya dengan cara baru yang menganalisa perubahan (mutasi) dalam DNA ketika ia menyadari bahwa ia bukan menemukan sebuah metode memperkuat setiap wilayah DNA. Mullis mengatakan bahwa sebelum perjalanan sepeda motor sudah berakhir, dia sudah menikmati prospek Hadiah Nobel. Ia berbagi Hadiah Nobel Kimia dengan Michael Smith pada tahun 1993.

Seperti Mullis telah tertulis dalam Scientific American: “Dimulai dengan satu molekul DNA materi genetik, PCR dapat menghasilkan 100 miliar molekul serupa di sore Reaksi mudah untuk mengeksekusi Hal ini membutuhkan tidak lebih dari sebuah tabung uji,.. Beberapa reagen sederhana, dan sumber panas. “

Apa RT PCR?

RT-PCR (Lookup reaksi berantai polimerase transcriptase-) adalah teknik yang sangat sensitif untuk deteksi dan kuantisasi mRNA (messenger RNA). Teknik ini terdiri dari dua bagian:

Sintesis cDNA (DNA komplementer) dari RNA dengan transkripsi terbalik (RT) dan
Amplifikasi cDNA yang spesifik oleh polymerase chain reaction (PCR).
RT-PCR telah digunakan untuk mengukur viral load HIV dan juga dapat digunakan dengan virus RNA lainnya seperti campak dan gondok.